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  羅氏地高辛產品選擇指南  
 

羅氏應用科學部(Roche Applied Science)是最早致力于向用戶提供非放射標記技術的公司之一,讓更多的科研工作者們可以避免使用危險的放射性同位素。自1995年德國寶靈曼公司的地高辛產品上市以來,盡管陸續有許多出色的競爭者涉足這一領域,盡管有定量PCR技術的應用,DIG系統仍然是非放射性高效標記檢測技術的首選,被廣泛地應用各種膜雜交及原位雜交技術中。不久,德國寶靈曼公司的地高辛系列產品被羅氏收購。地高辛產品現在羅氏應用科學部生產與銷售。 

技術原理: 
地高辛標記技術源于一種從洋地黃類植物(毛地黃和毛花毛地黃)中提取的類固醇(Steroid)物質—— Digoxigenin DIG),在醫學上可用于治療各種急性和慢性心功能不全以及室上性心動過速、心房顫動和撲動等疾病。由于洋地黃植物的花和葉片Digoxigenin在自然界中的唯一來源,因此抗DIG的抗體不會與其他的生物物質結合,從而可以滿足特異性標記的需要。這一點,正是DIG勝于生物素(Biotin)的地方——同樣是小分子標記物,生物素廣泛存在于各種組織中,對于靈敏度很高的標記檢測實驗來說,樣品自身含有的內源生物素,就會對結果產生干擾。地高辛就能夠很好地避免這個問題。

技術特點: 
與放射性標記和檢測技術相比較,DIG 系統具有一下多個優勢:
ü高靈敏度,完全可滿足實驗需要,某些方面甚至可與放射性標記的靈敏度向媲美
ü曝光時間短,結果顯示時間以分鐘計算,無需幾小時甚至幾天的自顯影過程
ü安全環保,不接觸放射性物質,不會對環境造成污染
ü探針可重復使用,最少可以穩定儲存一年
ü可輕松進行探針撥離和重探
ü憑借多年的經驗和眾多使用者的反饋意見,提供全面的應用指南

應用領域: 
地高辛系統能夠安全高效地標記DNA, RNA或是寡聚核苷酸探針,這些探針可以被廣泛地應用在
üSouthern blotting, dot blotting
üNorthern blotting
üArray
üColony hybridization
üIn situ hybridization
üELISA 
  

技術細節: 

 DIG 通過一個含有11個碳原子的空間臂與尿嘧啶核苷酸上的C5位置相連,一定濃度的DIG標記的核苷酸可以通過DNA polymerase (E.coli DNA Polymerase, T4 DNA Polymerase, T7 DNA Polymerase, Reverse Transcriptase, Taq DNA Polymerase )、RNA polymerase (SP6, T3T7 RNA Polymerase)或是末端轉移酶(Terminal Transferase)的作用摻入到核苷酸探針中;也可通過隨即引物標記(random primed labeling, 缺口平移(nick translation),PCR3’端標記/加尾或是體外轉錄制備帶有DIG標記的探針。當然也可以通過化學合成的方法進行核苷酸的標記。

對于DIG 標記探針的雜交檢測,可選用連接有堿性磷酸酶(alkaline phosphatase),過氧化物酶(peroxidase),熒光素(fluorescein,若丹明(rhodamine)或是膠體金(colloidal gold)高親和性的抗DIG抗體共軛物;也可選用不帶任何共軛連接的抗DIG抗體和二級抗體。
檢測的靈敏度主要依賴于對不同抗DIG抗體共軛物顯示方法的選擇。以連接有堿性磷酸酶的抗DIG 抗體為例:即可以使用NBTBCIP做底物的顯色法,也可以使用HNPP熒光堿性磷酸酶底物,檢測的靈敏度常規可達到0.1pg (Souther blot)
 

名稱

編號

產地

規格

價格¥

DIG DNA Labeling and Detection Kit
地高辛DNA標記和檢測試劑盒

11093657910 

Roche

Kit

7795

DIG-11-dUTP隨機引物法標記DNA, 堿性磷酸酶(AP)生色反應檢測, 標記探針用于SouthernNorthern和斑點雜交以及菌落和噬菌體篩選。組成: 未標記對照DNA1; 未標記對照DNA2; DNA稀釋液; DIG-標記對照DNA; 六核苷酸混合物; Klenow 2u/μl; 封閉液; BCIP/NBT; 10×dNTP標記混合物; -地高辛-堿性磷酸酶復合物。一個Kit可用于25次標記反應和50次檢測(100cm2), -20保存。


DIG-High Prime DNA Labeling and
Detection Starter Kit I
高效DNA地高辛標記和檢測試劑盒I

11745832910      

Roche

Kit

4872

比普通DIG隨機引物法標記效率高, 操作簡單, 可用于SouthernNorthern和斑點雜交以及菌落和噬菌體篩選。一個Kit可用于12次標記反應和24次檢測反應。組成: 5×DIG-高效標記試劑; 未標記對照DNA, PBR328; DNA稀釋液; -DIG-堿性磷酸酶復合物; NBT/BCIP儲存液; 10×封閉液; DIG定量復試紙條; DIG對照試紙條, -20保存。

DIG-High Prime DNA Labeling and
Detection Starter Kit II
高效DNA地高辛標記和檢測試劑盒II

11585614910

Roche

Kit

4998

比普通DIG隨機引物法標記效率高, 采用CSPD化學發光檢測靈敏度更高。一個Kit可用于12次標記反應和24次檢測反應。組成: 5×高效DIG標記復合物; 未標記對照DNA, PBR328; DNA稀釋液; -DIG-堿性磷酸酶連接物; CSPD; 10×封閉液; DIG定量試紙條; DIG對照試紙條, NBT/BCIP儲存液; -20保存。


DIG DNA Labeling Kit
地高辛DNA標記試劑盒

11175033910

Roche

40T

6922

隨機引物擴增法以DIG-11-dUTP標記DNA; DIG標記探針可用于各種膜雜交。

DIG Nucleic acid Detection Kit
地高辛核酸檢測試劑盒

11175041910

Roche

Kit

4612

NBT/BCIP顯色法檢測, 靈敏度可達0.1pg同源DNA; 可檢測40100cm2雜交膜。-20保存。

DIG Oligonucleotide 3’-End Labeling Kit
寡核苷酸3’末端地高辛標記試劑盒

3353575910

Roche

25T

6636

通過末端轉移酶以DIG-11-ddUTP標記14-100bp的寡核苷酸探針3’端用于各種膜雜交和原位雜交。每個反應可標記100pmol的寡聚核苷酸。

DIG Oligonucleotide Tailing Kit
寡核苷酸加尾地高辛標記試劑盒

<, P style="LINE-HEIGHT: 13.5pt" class=MsoNormal align=left>3353583910

Roche

25 T

5594

通過末端轉移酶以DIG-11-ddUTP在寡核苷酸探針3’端加一平均長度50bp(10-100bp)的寡核苷酸, 用于DNA/RNA膜雜交和原位雜交。每個反應可標記100pmol的寡聚核苷酸。


DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)
地高辛RNA標記試劑盒(SP6/T7)

11175025910

Roche

2´10T

6779

SP6T7 RNA聚合酶通過轉錄反應過程標記RNA, 1mg模板可產生約10mg標記RNA用于雜交。-20保存。組成: pSPT18 DNA, pSPT19 DNA, 對照DNA1, 對照DNA2, DIG標記對照RNA, NTR標記混合物, 轉錄緩沖液, RNase抑制劑, RNaseDNase I, SP6 RNA聚合酶, T7 RNA聚合酶。

PCR DIG Probe Synthesis Kit
PCR
地高辛探針合成試劑盒

11636090910

Roche

25T

3200

標記的探針可在Southern雜交后從5-10mg的人基因組DNA檢測出單拷貝基因, 是從少量DNA模板制備大量探針的最有效、最經濟的方法。

DIG Northern Starter Kit

12039672910

Roche

10T

4511

包含標記DIG RNA及進行Northern印跡的所有必需試劑, 配合DIG Wash and Block Buffer Set方便進行Northern印跡; 能作10個標記反應及10次檢測(100mm2)。特別適合初用者使用; 標記混合物經最優化, 配合提供的化學發光底物CDP-Star, 能產生最高的靈敏度。

DIG Luminescent Detection Kit
地高辛發光檢測試劑盒

 11363514910

Roche

Kit

5023

CSPD化學發光法檢測, 靈敏度可達0.03pg同源DNA; 可檢測50100cm2雜交膜。

DIG High Prime
高效地高辛DNA標記試劑

11585606910

Roche

40T

3100

標記DNA探針, 只需一步操作, 標記效率較通常隨機引物法高3倍。40T

 
根據標記方法選擇探針
標記DNA探針

貨號
貨名
規格
方法
說明
11745816910
DIG-Nick Translation Mix
160 µl,40次標記反應
缺口平移法
此方法標記的探針可以控制探針長度,一般多用于原位雜交
11745832910
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I
12次標記反應,24次雜交檢測
 
 
 
隨機引物法
集標記、封閉、雜交和檢測于一體的試劑盒(顯色法,底物為NBT/BCIP),應用于Southern、Northern、dot及菌斑雜交
11585614910
 
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ
12次標記反應,24次雜交檢測
同上述Kit I相似,區別在于化學發光法檢測,底物為CSPD
 
PCR DIG Labeling Mix
500ul,50次標記反應(100ul終體積)
PCR擴增法
此法適用于模板量少或質量不夠高的情況,包含dNTPs和DIG-11-dUTP,多用于dot blot

 
標記RNA探針

貨號
貨名
規格
方法
說明
11209256910
 
Digoxigenin-11-UTP
25 µl 250 nmol (10 mM)
 
 
 
 
 
轉錄標記法
DIG標記的尿嘧啶核苷三磷酸,用于標記RNA
 
03359247910
 
57 µl 200 nmol (3.5 mM)
11277073910
DIG RNA Labeling Mix, 10×
40 µl,20次標記反應
包含NTPs及DIG-11-UTP
11175025910
DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)
20次標記反應
通過SP6, T7 RNA聚合酶將DIG-11-UTP摻入到轉錄的RNA中,應用于Southern、Northern、原位及菌斑雜交
12039672910
DIG-Northern Starter Kit
10次標記反應,10次雜交檢測
以線性的DNA為模板,通過SP6, T7或是T3 RNA聚合酶將DIG-11-UTP摻入到轉錄的RNA中,借助化學發光底物CDP-Star檢測,用于Northern雜交

 
標記寡核苷酸探針 

貨號
貨名
規格
方法
說明
 
 
11333054001
Digoxigenin-3-O-methylcarbonyl-ε-aminocaproic acid-N-hydroxysuccinimide ester
 
5 mg
 
5’-末端標記法
 
用于蛋白質或寡核苷酸的DIG標記
 
3353583910
DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2nd generation
25次
 
 
3’-末端標記法
用于膜雜交或原位雜交
 
 
3353591910
DIG Gel Shift Kit, 2nd generation New formulation containing Terminal Transferase, recombinant
20次標記反應、200次結合反應、20次雜交檢測及20次對照反應
用于凝膠遷移分析EMSA實驗,檢測DNA-蛋白質復合物

 
根據實驗方法選擇產品
Southern blotting

貨號
貨名
規格
方法
說明
11745832910
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I
12次標記反應,24次雜交檢測
 
 
 
隨機引物法
集標記、封閉、雜交和檢測于一體的試劑盒(顯色法,底物為NBT/BCIP),應用于Southern、Northern、dot及菌斑雜交
11585614910
 
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit 
12次標記反應,24次雜交檢測
同上述Kit I相似,區別在于化學發光法檢測,底物為CSPD
 
11585550910
PCR DIG Labeling Mix
500ul,50次標記反應(100ul終體積)
PCR擴增法
此法適用于模板量少或質量不夠高的情況,包含dNTPs和DIG-11-dUTP,多用于dot blot
3353583910
DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2ndgeneration
25次
3’-末端標記法
用于膜雜交或原位雜交

 
Northern blotting

貨號
貨名
規格
方法
說明
11175025910
DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)
20次標記反應
 
 
轉錄標記法
通過SP6, T7 RNA聚合酶將DIG-11-UTP摻入到轉錄的RNA中,應用于Southern、Northern、原位及菌斑雜交
12039672910
DIG-Northern Starter Kit
10次標記反應,10次雜交檢測
以線性的DNA為模板,通過SP6, T7或是T3 RNA聚合酶將DIG-11-UTP摻入到轉錄的RNA中,借助化學發光底物CDP-Star檢測,用于Northern雜交
3353583910
DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2nd generation
25次
3’-末端標記法
用于膜雜交或原位雜交

 
Colony and plaque hybridization

貨號
貨名
規格
方法
說明
11585550910
PCR DIG Labeling Mix
500ul,50次標記反應(100ul終體積)
PCR擴增法
此法適用于模板量少或質量不夠高的情況,包含dNTPs和DIG-11-dUTP,多用于dot blot

 
 In situ hybridization

貨號
貨名
規格
方法
說明
11745816910
DIG-Nick Translation Mix
160 µl,40次標記反應
缺口平移法
此方法標記的探針可以控制探針長度,一般多用于原位雜交
11585550910
PCR DIG Labeling Mix
500ul,50次標記反應(100ul終體積)
PCR擴增法
此法適用于模板量少或質量不夠高的情況,包含dNTPs和DIG-11-dUTP
3353583910
DIG Oligonucleotide Tailing Kit, 2nd generation
25次
3’-末端標記法
用于膜雜交或原位雜交
11175025910
DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)
20次標記反應
轉錄標記法
通過SP6, T7 RNA聚合酶將DIG-11-UTP摻入到轉錄的RNA中,應用于Southern、Northern、原位及菌斑雜交

 
ELISA

貨號
貨名
規格
方法
說明
11636120910
PCR ELISA, DIG-Labeling
50次標記反應
 
PCR擴增法
用于標記帶DIG的PCR產物
11636111910
PCR ELISA, DIG-Detection
192次檢測反應
用于檢測DIG標記的PCR產物

 
根據檢測方法選擇產品
靈敏度更高的化學發光法
貨號
貨名
規格
12041677001
CDP-Star,即用
2 x 50 ml
11755633001
CSPD,即用
2 x 50 ml
12039672910
DIG-Northern Starter Kit
10次標記反應,10次雜交檢測
11585614910
 
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit Ⅱ
12次標記反應,24次雜交檢測
 
方便直觀的顯色法
貨號
貨名
規格
11442074001
BM Purple AP Substrate
100 ml
11681451001
NBT/BCIP Stock Solution
8ml
11496549001
Fast Red Tablets
20 tablets
11745832910
DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I
12次標記反應,24次雜交檢測
 
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