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  cDNA文庫構建  
 

 

 

 

技術簡介:

cDNA文庫是以特定的組織或細胞mRNA為模板,逆轉錄形成的互補DNAcDNA)與適當的載體(常用噬菌體或質粒載體)連接后轉化受體菌形成重組DNA克隆群,這樣包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織或細胞的cDNA文庫。cDNA文庫特異地反映某種組織或細胞中,在特定發育階段表達的蛋白質的編碼基因,因此cDNA文庫具有組織或細胞特異性。cDNA文庫比基因組DNA文庫小得多,能夠比較容易從中篩選克隆得到細胞或組織特異表達的基因。cDNA文庫在研究具體某類特定細胞中基因組的表達狀態及表達基因的功能鑒定方便具有特殊的優勢,從而使它在個體發育、細胞分化、細胞周期調控、細胞衰老和死亡調控等生命現象的研究中具有更為廣泛的應用價值,是研究工作中最常使用到的基因文庫。

經典cDNA文庫構建基本原理:用OligodT)作逆轉錄引物,或者用隨機引物,給所合成的cDNA 加上適當的連接接頭,連接到適當的載體中獲得cDNA文庫。其基本步驟包括:(1mRNA的提取。獲取高質量的mRNA是構建高質量的cDNA文庫的關鍵步驟之一。(2cDNA第一條鏈的合成。(3cDNA第二條鏈的合成。(4)雙鏈cDNA的修飾。(5)雙鏈cDNA的分子克隆。(6cDNA文庫的擴增。(7cDNA文庫鑒定評價。

客戶須知:

1. 客戶須在實驗開始前確保其提供材料的數量和質量,并提供相關信息。

客戶可提供組織(2001000μg)、細胞(106)或總RNA >1μg ),請務必保持樣品新鮮,RNA無任何降解,植物材料應避免過老的組織,盡量用柔嫩部位,以確保文庫質量。同時請盡量提供物種基因組背景資料信息,如:基因組大小,基因平均長度,預計表達的基因數量等等。

材料具體要求:

    A. 動物、植物、微生物組織 請提供足量的新鮮樣品(4℃保存,不超過一天)或將新鮮樣品立即存于液氮或-80℃后保存不超過一個星期。

注意: 用植物樣品構建基因組文庫,為了降低文庫中的葉綠體污染,樣品須是植物的黃化苗嫩芽。若需建cDNA文庫,樣品必須是新鮮保存的。
   
B. RNA 如要提供RNA,要求總RNA500ug,濃度>1ug/ulmRNA3ug,濃度>50ng/ulOD260/OD280值:2.0,以我方電泳膠圖、紫外分析儀定量檢測為準。 RNA的總量根據庫容量不同會有所增加。

注意: a) 建議由我方提取RNAb) 對于客戶提供的RNA,由于樣品原因建庫可能沒有結果或結果不好,其損失和責任全部由樣品提供方承擔;c)由樣品質量產生的任何問題,其損失和責任應全部由樣品提供方承擔。 

2. 本公司在收到客戶提供的研究材料后會在第二個工作日起開始服務工作。

3. 工作完成后,本公司會將結果及時發給客戶,同時根據客戶要求處理相關材料。

4. 客戶應對所提供的材料及信息負責,如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經濟損失全部由客戶承擔。

服務承諾:

1. 本公司將在保證質量的前提下,在最短的時間內完成實驗。

2. 本公司保證檢測結果準確、客觀、可信。

3. 公司將對所有技術服務相關材料信息保密,并會在服務完成后按客戶要求對相關材料進行合理處理。

服務周期:

實驗周期一般為得到合格的總RNA1545個工作日。

1. 從客戶提供的材料中提取高質量的mRNA

2. 根據客戶需求構建普通cDNA文庫、全長cDNA文庫和均一化cDNA文庫。

服務內容:

公司擁有一批優秀的文庫構建專業技術人員,可以提供標準化cDNA文庫構建以及EST測序和分析服務,可以針對動物、植物、微生物等的組織和細胞等材料進行文庫構建(普通cDNA文庫、全長cDNA文庫和均一化cDNA文庫)。
   
1)普通cDNA文庫(質粒文庫、噬菌體文庫)構建
   
文庫特點:

A.材料用量少,只需要1mgTotal RNA

B.采用Clontech SMART專利技術,技術成熟,全長比率高。

2)均一化文庫構建
   
均一化cDNA文庫是克服基因轉錄水平上巨大差異給文庫篩選和分析帶來障礙的有效措施,有利于研究基因的表達和序列分析。我們基于雙鏈特異性核酸酶(Duplex-Specific Nuclease DSN)的先進cDNA文庫均一化技術構建均一化cDNA文庫,能減低高豐度表達基因100倍以上,有效富集低豐度表達基因。

文庫特點:
   
1.
無需反復雜交過程,均一化程度高。
   
2.均一化后平均插入片斷大小無明顯變化。

3)全長文庫構建
   
利用公司專有技術和專門試劑盒,進行全長文庫構建服務。尤其適合希望獲得高比例全長基因的客戶。

文庫特點:

1.不經過PCR過程,容易獲得低豐度基因

2.全長比例高(全長比例>80%
   
3.樣品用量大,需要25mgmRNA,因此,不適合樣品量少的材料。

交貨產品:

A. 產物電泳圖譜;

B. 初始庫,保存在-20℃;

C. 文庫評價數據,包括庫容量,插入片段平均長度,重組效率,cDNA完整性評價等。技術指標:庫容≥1.0×106insert400 bp,平均 insert1.3Kb

D. 實驗報告(包括實驗流程,材料和方法等)。

優惠報價:

cDNA文庫構建:1-3萬元人民幣

全長cDNA文庫構建:3.0-5.0萬元人民幣

均一化cDNA文庫構建:3.5-6萬元人民幣

cDNA測序: 

10,000條序列         20/

5,000-10,000條序列         25/

5000條序列          30/

信息服務:1.5-4.0萬元

基本信息服務:從峰圖到序列的轉化,控制低質量,去除載體序列;序列拼接;EST注釋;ORF預測及分析;利用 nrnt數據庫進行注釋。

高級信息服務:代謝途徑分析;功能蛋白分析;Interpro功能域分析;序列屬性及其對應unigene分析;COG分析;EST相關網絡數據庫構建。

 

 

 
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